Plasmide CRISPR d'Activation (m) CYPOR: sc-422345-ACT

Le gène **Por** chez la souris code la **cytochrome P450 oxydoréductase** (CYPOR), une flavoprotéine membranaire du réticulum endoplasmique (RE) qui transfère des électrons du NADPH aux enzymes cytochromes P450 microsomales ainsi qu’à d’autres partenaires d’oxydo‑réduction. En permettant les cycles catalytiques des P450, la CYPOR soutient le métabolisme oxydatif des lipides et stéroïdes endogènes, ainsi que la biotransformation des xénobiotiques, reliant l’activité de Por à la détoxification hépatique, à l’homéostasie rédox et aux réseaux métaboliques associés au RE. Une fonction altérée de la CYPOR perturbe les voies dépendantes des P450 et peut modifier l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène, faisant de Por une variable clé dans les modèles de stress métabolique et de phénotypes liés à la pharmacologie. En recherche biomédicale, Por est couramment étudié pour dissocier les exigences de transfert d’électrons des P450 des effets spécifiques aux substrats et pour cartographier les relations génotype‑métabolite à travers les tissus.

CYPOR Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Por sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYPOR Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Por dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Por, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYPOR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Por natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYPOR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYPOR dans les cellules tumorales présentant une expression de Por silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.