Plásmido Doble Nickase (m) CYP7A1: sc-419932-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)CYP7A1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CYP7A1 (m) y el plásmido de doble nickasa CYP7A1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Cyp7a1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CYP7A1 Anticuerpo (E-10): sc-518007
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) CYP7A1 | sc-419932-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) CYP7A1 | sc-419932-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen murino Cyp7a1 codifica la colesterol 7α-hidroxilasa (CYP7A1), una enzima del citocromo P450 enriquecida en el hígado que cataliza el paso limitante de la velocidad en la vía clásica de síntesis de ácidos biliares a partir del colesterol. Al controlar la conversión de colesterol en ácidos biliares primarios, CYP7A1 regula el tamaño del reservorio de ácidos biliares, la homeostasis del colesterol hepático y el metabolismo posterior de lípidos y glucosa mediante redes de señalización sensibles a los ácidos biliares. La actividad de Cyp7a1 se interrelaciona con vías de receptores nucleares, entre ellas FXR y LXR, que coordinan la regulación por retroalimentación de la biosíntesis y el transporte de ácidos biliares. Las alteraciones en la expresión o la función de CYP7A1 se utilizan ampliamente como punto de entrada mecanístico para estudiar fenotipos colestásicos, dislipidemia y estrés metabólico inducido por la dieta en modelos murinos.
CYP7A1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cyp7a1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cyp7a1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cyp7a1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cyp7a1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.