CYP7A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419932-ACT

O gene Cyp7a1 de camundongo codifica a colesterol 7α-hidroxilase (CYP7A1), uma enzima do citocromo P450 enriquecida no fígado que catalisa a etapa limitante da via clássica de síntese de ácidos biliares a partir do colesterol. Ao controlar a conversão do colesterol em 7α-hidroxicolesterol, a CYP7A1 determina o tamanho e a composição do pool de ácidos biliares, influenciando a sinalização entero-hepática por meio de FXR/FGF15 e a regulação subsequente do metabolismo de lipídios, glicose e energia. A atividade de Cyp7a1 integra a homeostase hepática do colesterol a programas transcricionais dependentes de ácidos biliares, interagindo com o metabolismo de lipoproteínas e com redes de processamento de xenobióticos. A expressão desregulada de CYP7A1 é frequentemente estudada no contexto de hipercolesterolemia, fenótipos de fígado gorduroso e modelos de inflamação metabólica nos quais a sinalização por ácidos biliares está alterada.

CYP7A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cyp7a1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP7A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cyp7a1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cyp7a1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP7A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cyp7a1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP7A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP7A1 em células tumorais com expressão de Cyp7a1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.