Plasmide CRISPR d'Activation (h2) CYP4X1: sc-415272-ACT-2

Le gène humain CYP4X1 code une monooxygénase du cytochrome P450 de la famille CYP4 qui catalyse le métabolisme oxydatif de lipides endogènes, contribuant à l’hydroxylation des acides gras et à des processus de signalisation associés dérivés des eicosanoïdes. L’activité de CYP4X1 est liée à l’homéostasie des lipides membranaires et à la régulation, dépendante du statut rédox, des réponses cellulaires, ce qui l’inscrit dans des voies coordonnant le renouvellement des médiateurs lipidiques et une spécialisation métabolique propre à certains tissus. Une expression dérégulée ou une oxydation lipidique altérée associée à CYP4X1 a été étudiée dans les domaines des neurosciences et de l’oncologie, où des modifications des métabolites liés à l’acide arachidonique peuvent influencer la signalisation associée à l’inflammation et les programmes de prolifération cellulaire. L’édition du gène CYP4X1 soutient les études mécanistiques du métabolisme lipidique dépendant des P450, la cartographie des substrats et la métabolomique, ainsi que la validation des effets de ces voies dans des modèles cellulaires modifiés pertinents pour la biologie des maladies humaines.

CYP4X1 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP4X1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP4X1 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP4X1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP4X1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP4X1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP4X1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP4X1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP4X1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP4X1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.