Plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP2J6 (m): sc-419921

Présentation

Cyp2j6 code l’enzyme du cytochrome P450 CYP2J6, une monooxygénase associée au réticulum endoplasmique qui catalyse le métabolisme oxydatif de lipides endogènes et de xénobiotiques. Les enzymes de la famille CYP2J contribuent à l’activité époxygénase de l’acide arachidonique, produisant des acides époxyeicosatriénoïques qui modulent la signalisation inflammatoire, le tonus vasculaire et les réponses au stress cellulaire. Par ses rôles dans l’équilibre redox et l’homéostasie des médiateurs lipidiques, Cyp2j6 peut influencer des voies liées au métabolisme hépatique et extra-hépatique, à la régulation immunitaire et à la susceptibilité aux lésions tissulaires induites par des toxiques. Une signalisation lipidique dépendante des P450 altérée est fréquemment exploitée dans des modèles murins pour étudier des mécanismes pertinents pour la dysfonction cardiométabolique et la biologie des maladies inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP2J6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cyp2j6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cyp2j6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cyp2j6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CYP2J6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cyp2j6 pour l'étude de la signalisation de CYP2J6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cyp2j6 essentiels à la fonction de CYP2J6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cyp2j6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CYP2J6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CYP2J6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cyp2j6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CYP2J6 plasmide HDR (m) et le CYP2J6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cyp2j6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cyp2j6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.