CYP2J2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402955

Visão geral

O CYP2J2 codifica uma monooxigenase microssomal do citocromo P450 que catalisa a oxidação dependente de NADPH de lípidos endógenos e xenobióticos, com atividade epoxigenase notável sobre o ácido araquidónico para gerar ácidos epoxieicosatrienoicos (EETs). Estes metabolitos contribuem para a regulação do tónus vascular, da sinalização inflamatória, da proliferação celular e das respostas ao stress oxidativo, ligando a atividade do CYP2J2 às vias dos eicosanoides e de mediadores lipídicos. A expressão do CYP2J2 em tecidos cardiovasculares e extra-hepáticos sustenta funções na atividade endotelial e na homeostase metabólica, e alterações na expressão ou na atividade têm sido associadas a fenótipos cardiometabólicos e inflamatórios. Em biologia do cancro, a sinalização lipídica dependente do CYP2J2 tem sido investigada em relação à sobrevivência e migração de células tumorais e à comunicação com o microambiente, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CYP2J2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CYP2J2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CYP2J2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CYP2J2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CYP2J2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CYP2J2 para a investigação da sinalização de CYP2J2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CYP2J2 críticos para a função CYP2J2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CYP2J2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CYP2J2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CYP2J2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CYP2J2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CYP2J2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CYP2J2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CYP2J2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CYP2J2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.