CYP2J2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402955

Descripción general

CYP2J2 codifica una monooxigenasa microsomal del citocromo P450 que cataliza la oxidación dependiente de NADPH de lípidos endógenos y xenobióticos, con una destacada actividad epoxigenasa sobre el ácido araquidónico para generar ácidos epoxieicosatrienoicos (EET). Estos metabolitos contribuyen a la regulación del tono vascular, la señalización inflamatoria, la proliferación celular y las respuestas al estrés oxidativo, vinculando la actividad de CYP2J2 con las vías de los eicosanoides y de los mediadores lipídicos. La expresión de CYP2J2 en tejidos cardiovasculares y extrahepáticos respalda su papel en la función endotelial y la homeostasis metabólica, y las alteraciones en su expresión o actividad se han asociado con fenotipos cardiometabólicos e inflamatorios. En biología del cáncer, la señalización lipídica dependiente de CYP2J2 se ha investigado en relación con la supervivencia y migración de células tumorales, así como con el crosstalk del microambiente tumoral, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CYP2J2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CYP2J2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CYP2J2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CYP2J2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CYP2J2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CYP2J2 para la investigación de la señalización de CYP2J2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CYP2J2 críticos para la función de CYP2J2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CYP2J2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CYP2J2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CYP2J2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CYP2J2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CYP2J2 (h) y el plásmido HDR CYP2J2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CYP2J2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CYP2J2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.