Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
CYP27A1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402836-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYP27A1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYP27A1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CYP27A1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYP27A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CYP27A1: sc-390974
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP27A1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402836-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP27A1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402836-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **CYP27A1** kodiert die Sterol-27-Hydroxylase, ein mitochondriales Cytochrom-P450-Enzym, das die Oxidation von Cholesterin und Sterol-Zwischenprodukten während der Gallensäurebiosynthese katalysiert. Durch die Bildung von 27-hydroxylierten Sterolen unterstützt **CYP27A1** den mitochondrialen Sterolabbau, trägt zur Lipidhomöostase bei und ist in Signalwege der hepatischen Gallensäuren, des Cholesterintransports und der Oxysterol-Signalgebung eingebunden. Eine veränderte **CYP27A1**-Aktivität beeinflusst die Zusammensetzung von Sterolen und Gallensäuren und wurde mit angeborenen Störungen des Gallensäurestoffwechsels wie der zerebrotendinösen Xanthomatose in Verbindung gebracht, mit nachgelagerten Effekten auf Cholesterinablagerung und den Sterolhaushalt in Geweben. **CYP27A1** wird daher häufig in der Stoffwechselbiologie, der Funktion mitochondrialer P450-Enzyme und der oxysterolvermittelten Regulation nukleärer Rezeptornetzwerke untersucht.
CYP27A1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYP27A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYP27A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYP27A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYP27A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.