Plasmide Double Nickase (h) CYP26A1: sc-402832-NIC

CYP26A1 code une monooxygénase du cytochrome P450 qui catalyse le métabolisme oxydatif de l’acide rétinoïque tout-trans, façonnant ainsi les gradients intracellulaires de rétinoïdes et contrôlant l’intensité et la durée de la signalisation des récepteurs de l’acide rétinoïque (RAR/RXR). En régulant la disponibilité de l’acide rétinoïque, CYP26A1 influence des programmes transcriptionnels impliqués dans la mise en place des structures embryonnaires, la différenciation épithéliale et l’homéostasie tissulaire. L’activité de CYP26A1 s’inscrit dans les voies métaboliques des rétinoïdes et dans des interactions croisées avec des réseaux du développement et des réseaux sensibles aux hormones, qui affectent les décisions de destinée cellulaire. Une expression ou une fonction dérégulée de CYP26A1 peut perturber la signalisation des rétinoïdes et a été associée à des anomalies du développement ainsi qu’à des états de différenciation altérés, pertinents pour le cancer et d’autres affections sensibles aux rétinoïdes.

CYP26A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP26A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP26A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP26A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP26A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.