Plasmide Double Nickase (h) CYP21A2: sc-402919-NIC

CYP21A2 code l’enzyme cytochrome P450 stéroïde 21-hydroxylase, une monooxygénase associée au réticulum endoplasmique, indispensable à la stéroïdogenèse surrénalienne. Elle catalyse des étapes clés d’hydroxylation dans les voies biosynthétiques menant au cortisol et à l’aldostérone, influençant ainsi l’homéostasie des glucocorticoïdes et des minéralocorticoïdes. L’activité de CYP21A2 s’intègre aux réseaux stéroïdogènes mitochondriaux et microsomaux, notamment via le transfert d’électrons depuis le NADPH par la P450 oxydoréductase et une régulation coordonnée des programmes de zonation surrénalienne. Les variants entraînant une perte de fonction de CYP21A2 sont fortement associés à l’hyperplasie congénitale des surrénales due à un déficit en 21-hydroxylase, ce qui en fait une cible centrale pour l’étude de la biosynthèse des stéroïdes et des mécanismes des maladies endocriniennes dans des modèles cellulaires humains.

CYP21A2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP21A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP21A2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP21A2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP21A2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.