CYP1A2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401178

Descripción general

CYP1A2 codifica una monooxigenasa microsomal del citocromo P450 que cataliza el metabolismo oxidativo de diversos xenobióticos y sustratos endógenos, contribuyendo al aclaramiento hepático de fármacos y a la desintoxicación de compuestos químicos. Su transcripción está regulada por vías de detección de xenobióticos, incluida la señalización del receptor de hidrocarburos de arilo (AHR), y su actividad enzimática se relaciona con la homeostasis redox mediante el acoplamiento con la reductasa NADPH–P450. La variación genética y ambiental en CYP1A2 puede modificar la capacidad metabólica, influyendo en la susceptibilidad a respuestas adversas a fármacos y en la sensibilidad diferencial a procarcinógenos. Por ello, CYP1A2 se estudia con frecuencia en farmacogenómica, toxicología y en modelos de función metabólica específica del hígado.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CYP1A2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CYP1A2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CYP1A2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CYP1A2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CYP1A2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CYP1A2 para la investigación de la señalización de CYP1A2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CYP1A2 críticos para la función de CYP1A2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CYP1A2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CYP1A2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CYP1A2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CYP1A2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CYP1A2 (h) y el plásmido HDR CYP1A2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CYP1A2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CYP1A2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.