Plásmido CRISPR de Activación (m) CYP1A1: sc-419897-ACT

El gen Cyp1a1 de ratón codifica la enzima del citocromo P450 CYP1A1, una monooxigenasa dependiente de hemo que cataliza el metabolismo oxidativo de xenobióticos y sustratos endógenos. Su transcripción se induce fuertemente aguas abajo de la señalización del receptor de hidrocarburos arílicos (AHR), conectando ligandos ambientales con la biotransformación de fase I y las vías posteriores de desintoxicación. La actividad de CYP1A1 influye en el equilibrio redox celular y puede modular la producción de especies reactivas de oxígeno durante el recambio de sustratos, en intersección con programas de respuesta al estrés y señalización inflamatoria. La expresión o actividad desregulada de CYP1A1 se ha asociado con una susceptibilidad química alterada y procesos relevantes para la carcinogénesis, lo que respalda su uso en toxicología, biología de la exposición y estudios de interacción gen–ambiente.

CYP1A1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cyp1a1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYP1A1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cyp1a1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cyp1a1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYP1A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cyp1a1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYP1A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYP1A1 en células tumorales con expresión de Cyp1a1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.