Plásmido Doble Nickase (h) CYP17A1: sc-401918-NIC

CYP17A1 codifica el citocromo P450 17A1, una monooxigenasa microsomal que cataliza las reacciones de 17α-hidroxilasa y 17,20-liasa, esenciales para la esteroidogénesis. Al convertir la pregnenolona y la progesterona en intermediarios 17-hidroxilados y, posteriormente, generar dehidroepiandrosterona y androstenediona, CYP17A1 ayuda a regular el flujo a través de las vías biosintéticas de glucocorticoides y esteroides sexuales. Su actividad se integra con la transferencia de electrones desde la oxidorreductasa del P450 en el retículo endoplásmico e influye en los circuitos de retroalimentación endocrina que controlan la producción hormonal suprarrenal y gonadal. La función o la expresión desreguladas de CYP17A1 se han implicado en fenotipos de desequilibrio de hormonas esteroideas y ofrecen un punto de entrada mecanístico para estudiar la señalización vinculada al metabolismo en modelos de enfermedad relacionada con el sistema endocrino.

CYP17A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CYP17A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CYP17A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CYP17A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CYP17A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.