Plásmido CRISPR de Activación (h) CYP17A1: sc-401918-ACT

CYP17A1 codifica el citocromo P450 17A1, una monooxigenasa microsomal que cataliza tanto las reacciones de 17α-hidroxilasa como de 17,20-liasa en tejidos esteroidogénicos, dirigiendo el flujo a través de la biosíntesis de glucocorticoides y esteroides sexuales. Como nodo clave de la vía de las hormonas esteroideas, CYP17A1 influye en la producción posterior de andrógenos y estrógenos y contribuye a la regulación endocrina mediante su actividad coordinada con otras enzimas P450 y socios redox en el retículo endoplásmico. La alteración de la expresión o de la función enzimática de CYP17A1 se ha asociado con desequilibrios esteroidogénicos y fenotipos endocrinos, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos del metabolismo hormonal y de programas transcripcionales dependientes de señales. La modulación experimental de CYP17A1 respalda investigaciones sobre estados celulares impulsados por esteroides, reprogramación metabólica e interconexión entre vías relevante para la biología endocrina.

CYP17A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CYP17A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CYP17A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CYP17A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CYP17A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CYP17A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CYP17A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CYP17A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CYP17A1 en células tumorales con expresión de CYP17A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.