Plásmido CRISPR de Activación (h) cyclin G2: sc-403620-ACT

CCNG2 codifica la ciclina G2, una ciclina atípica que actúa principalmente como regulador negativo de la progresión del ciclo celular y de la proliferación celular. La ciclina G2 se induce por señales inhibidoras del crecimiento y por estímulos de estrés, y contribuye al control de los puntos de control (checkpoints) al modular la actividad de las quinasas dependientes de ciclina e integrar señales de vías como las respuestas dependientes de p53 y redes reguladoras asociadas a fosfatasas. Debido a sus efectos sobre la transición G1/S, la diferenciación y la sensibilidad a la apoptosis, la expresión de CCNG2 se estudia con frecuencia en el contexto de la alteración del control del ciclo celular observada en el cáncer y otros trastornos proliferativos. La desregulación de CCNG2 también se ha relacionado con cambios en la invasión, fenotipos asociados a metástasis y vías de respuesta a terapias en modelos tumorales, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de restricción del crecimiento.

cyclin G2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCNG2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

cyclin G2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCNG2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCNG2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de cyclin G2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCNG2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de cyclin G2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía cyclin G2 en células tumorales con expresión de CCNG2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.