Plasmide Double Nickase (h) CXXC5: sc-403248-NIC

CXXC5 (protéine 5 à doigt de zinc de type CXXC) est un régulateur nucléaire et cytoplasmique qui se lie à l’ADN riche en CpG et interagit avec des complexes associés à la chromatine afin de moduler les programmes transcriptionnels. Il agit comme inhibiteur par rétrocontrôle de la signalisation Wnt/β-caténine canonique via une interaction avec Dishevelled, influençant ainsi les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et la différenciation. CXXC5 a également été associé à des voies de réponse au stress et à la régulation de programmes d’identité cellulaire, ce qui le rend pertinent pour les études de biologie du développement et d’homéostasie tissulaire. Une expression ou une signalisation dérégulée de CXXC5 a été associée à des modifications des sorties de la voie Wnt observées dans le cancer et d’autres troubles prolifératifs, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans des recherches centrées sur les voies de signalisation.

CXXC5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CXXC5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CXXC5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CXXC5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CXXC5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.