CXCR-7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403187-ACT

ACKR3 (CXCR-7) kodiert einen atypischen Chemokinrezeptor, der an CXCL12/SDF-1 und CXCL11 bindet und primär als Ligandenfänger (Scavenger) sowie als Modulator der Signalübertragung fungiert – und nicht als klassischer, Gαi‑gekoppelter chemotaktischer Rezeptor. Durch die Formung von Chemokingradienten und durch Rezeptor‑Crosstalk beeinflusst CXCR-7 CXCR4‑abhängige Programme für Migration, Überleben und Adhäsion und wirkt sich auf nachgeschaltete Signalwege aus, darunter MAPK/ERK und β‑Arrestin‑assoziierte Signalgebung. In humanen Geweben trägt ACKR3 zur Dynamik des Transports von Gefäß- und Immunzellen bei und wird häufig in Kontexten wie Entzündung, Tumorzellinvasion, Metastasierungsbiologie und Angiogenese untersucht. Seine Expression und Aktivität werden außerdem in der Entwicklung und beim Gewebeumbau erforscht, wenn die Verfügbarkeit von Chemokinen für die Zellpositionierung geschwindigkeitsbestimmend ist.

CXCR-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ACKR3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CXCR-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ACKR3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ACKR3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CXCR-7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ACKR3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CXCR-7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CXCR-7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ACKR3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.