CUL-5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401344-ACT

Das humane Gen **CUL5** kodiert **Cullin-5 (CUL-5)**, eine Gerüstkomponente von **Cullin-RING-E3-Ubiquitin-Ligase-Komplexen**, die die Polyubiquitinierung und den proteasomalen Abbau spezifischer Substrate vermitteln. Durch die Assemblierung mit **Elongin B/C** und **SOCS-Box-Adapterproteinen** reguliert CUL-5 die Proteinhomöostase, die Stärke der Signaltransduktion sowie Zellzyklus- und Stressantwortprogramme, indem es die Stabilität von Signalintermediaten steuert. CUL-5-abhängige Ubiquitin-Signalgebung überschneidet sich mit Signalwegen, die Zytokin- und Wachstumsfaktorantworten kontrollieren, und beeinflusst dadurch Proliferation, Differenzierung und die Regulation der angeborenen Immunantwort. Eine dysregulierte CUL5-Expression oder eine veränderte Aktivität des **CRL5**-Komplexes wurde mit der Krebsbiologie und weiteren Erkrankungen in Verbindung gebracht, die mit einer fehlgesteuerten, ubiquitinvermittelten Proteinhomöostase einhergehen.

CUL-5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CUL5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CUL-5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CUL5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CUL5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CUL-5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CUL5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CUL-5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CUL-5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CUL5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.