CUL-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416925

Descripción general

CUL3 codifica la cullina 3 (CUL-3), un andamiaje central de los complejos de ligasa E3 de ubiquitina CUL3–RBX1 que reclutan proteínas adaptadoras con dominio BTB para conferir especificidad de sustrato a la ubiquitinación y a su recambio por el proteasoma. Mediante la degradación regulada de dianas implicadas en la homeostasis redox, el control del ciclo celular, la dinámica del citoesqueleto y la señalización de estrés, CUL-3 ayuda a coordinar vías como la función del sistema ubiquitina–proteasoma y las respuestas al estrés oxidativo mediadas por NRF2/KEAP1. La alteración de la ubiquitinación dependiente de CUL3 puede desestabilizar la proteostasis y las redes de señalización que configuran la inflamación, el metabolismo y la integridad del genoma. La actividad desregulada de CUL3 y las interacciones adaptador alteradas se han vinculado en la literatura con vías asociadas al cáncer y con mecanismos de enfermedad cardiovascular y del neurodesarrollo, lo que respalda su utilidad como nodo para el análisis de vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CUL-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CUL3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CUL3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CUL3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CUL-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CUL3 para la investigación de la señalización de CUL-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CUL3 críticos para la función de CUL-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CUL3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CUL-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CUL-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CUL3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CUL-3 (h) y el plásmido HDR CUL-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CUL3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CUL3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.