Plásmido Doble Nickase (h) CUL-1: sc-400972-NIC

El gen humano **CUL1** codifica la cullina-1 (CUL-1), un andamiaje central de los complejos ligasa E3 de ubiquitina **SCF** (SKP1–CUL1–F-box), que catalizan la ubiquitinación y el recambio proteasomal de sustratos fosforilados. Mediante un ensamblaje regulado con SKP1, RBX1 y diversos adaptadores F-box, CUL-1 controla transiciones del ciclo celular, el licenciamiento de la replicación del ADN y la transducción de señales al dirigir la degradación de reguladores clave como ciclinas, inhibidores de CDK y factores de transcripción específicos de cada vía. La actividad de CUL-1 está modulada por la dinámica de neddilación/desneddilación y vincula la proteostasis dependiente de ubiquitina con el control de puntos de control (checkpoints) y las respuestas al estrés. La desregulación del recambio de sustratos mediado por SCF–CUL1 se ha asociado con señalización oncogénica, inestabilidad genómica y alteraciones de la señalización inflamatoria o metabólica en contextos celulares relevantes para la enfermedad.

CUL-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CUL1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CUL1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CUL1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CUL1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.