Plasmide CRISPR/Cas9 KO CTP (m): sc-419996

Présentation

Slc25a1 code pour le transporteur mitochondrial du citrate CTP, un transporteur de la membrane interne qui exporte le citrate/isocitrate vers le cytosol en échange de malate. Ce flux relie le cycle de l’acide tricarboxylique à la production cytosolique d’acétyl‑CoA, soutenant la lipogenèse de novo, la biosynthèse du cholestérol et la régulation de l’expression génique dépendante de l’acétylation, tout en influençant l’équilibre rédox via des voies génératrices de NADPH. En coordonnant le transfert de carbone entre mitochondrie et cytosol, CTP contribue à l’adaptation métabolique lors de la prolifération et de la différenciation et peut moduler des programmes inflammatoires et de réponse au stress. Un transport du citrate dérégulé a été associé à des erreurs innées du métabolisme et à des phénotypes métaboliques plus larges, faisant de Slc25a1 une cible pertinente pour l’étude du métabolisme mitochondrial et de l’homéostasie lipidique dans des systèmes murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CTP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc25a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc25a1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc25a1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CTP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc25a1 pour l'étude de la signalisation de CTP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Slc25a1 essentiels à la fonction de CTP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc25a1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CTP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CTP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc25a1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CTP plasmide HDR (m) et le CTP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc25a1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc25a1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.