CtBP2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401865-NIC

Humanes **CTBP2** kodiert das C‑terminale Bindungsprotein 2 (CtBP2), einen NADH-sensitiven transkriptionellen Koregulator, der vor allem als Korepressor wirkt, indem er chromatinmodifizierende Komplexe – darunter HDACs und andere epigenetische Regulatoren – an sequenzspezifische Transkriptionsfaktoren rekrutiert. CtBP2 beeinflusst Genprogramme, die Proliferation, Linienfestlegung, epithelial-mesenchymale Transition und Apoptose steuern, und verknüpft so den zellulären Stoffwechselzustand mit der transkriptionellen Ausgabe. Über diese Aktivitäten moduliert CtBP2 Signalwege wie Wnt/β‑Catenin, TGF‑β und hypoxieassoziierte Transkriptionsnetzwerke und trägt dazu bei, Chromatinzugänglichkeit und Enhancer-Aktivität zu formen. Eine fehlregulierte Expression oder Funktion von CTBP2 wurde mit veränderter Differenzierung und tumorassoziierten transkriptionellen Zuständen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur Transkriptionsrepression und zur metabolischen Kontrolle der Genregulation macht.

CtBP2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CTBP2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CTBP2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CTBP2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CTBP2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.