Plásmido CRISPR de Activación (h) CtBP1: sc-400667-ACT

CTBP1 codifica la proteína de unión al extremo C 1 (CtBP1), un corregulador transcripcional sensible al NADH que integra el estado metabólico con los programas de expresión génica. CtBP1 forma complejos con factores de unión al ADN específicos de secuencia y con modificadores de la cromatina para regular la represión y la activación transcripcional, influyendo en la transición epitelio-mesénquima, la progresión del ciclo celular, la apoptosis y la diferenciación. Participa en vías de remodelación de la cromatina y control transcripcional al reclutar desacetilasas de histonas y otros reguladores epigenéticos, moldeando así la identidad celular y las respuestas al estrés. La actividad desregulada de CTBP1 se ha asociado con redes transcripcionales oncogénicas y decisiones alteradas del destino celular en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la transcripción y la epigenética.

CtBP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CTBP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CtBP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CTBP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CTBP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CtBP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CTBP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CtBP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CtBP1 en células tumorales con expresión de CTBP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.