Plásmido Doble Nickase (h) CstF-64: sc-402202-NIC

CSTF2 codifica la subunidad de 64 kDa del factor de estimulación de la escisión (CstF-64), un componente esencial de unión a ARN de la maquinaria de procesamiento del extremo 3′ del pre-ARNm. CstF-64 reconoce elementos de secuencia aguas abajo ricos en GU y coopera con CPSF y otros factores para promover la escisión endonucleolítica y la poliadenilación, moldeando así la estabilidad del transcrito, la traducción y los programas de expresión génica. Al influir en la elección de sitios alternativos de poliadenilación, CSTF2 ayuda a regular la longitud de la UTR 3′ y el control posranscripcional en contextos proliferativos y de respuesta al estrés. El procesamiento desregulado del extremo 3′ y la poliadenilación alternativa se asocian con frecuencia con firmas de expresión génica oncogénicas y otras alteraciones del transcriptoma relevantes para enfermedades, lo que convierte a CSTF2 en un objetivo valioso para estudios mecanísticos de la maduración del ARN.

CstF-64 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CSTF2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CSTF2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CSTF2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CSTF2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.