Plasmide CRISPR/Cas9 KO CSN8 (m): sc-430844

Présentation

Cops8 code CSN8, une sous-unité centrale du signalosome COP9 qui régule les ligases E3 ubiquitine cullin-RING en contrôlant l’état de neddylation des cullines et, ce faisant, en influençant le renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine. Par cette activité, CSN8 contribue à la protéostasie, à la progression du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à la signalisation adaptative au stress en modulant la stabilité de protéines régulatrices clés. Une perturbation de la fonction du signalosome COP9 a été associée à une signalisation inflammatoire altérée, à un développement et une homéostasie tissulaire compromis, ainsi qu’à une apoptose dérégulée, faisant de Cops8 un gène pertinent pour des études mécanistiques des voies qui relient la régulation de l’ubiquitine à la fitness cellulaire. Dans des modèles murins, l’altération des composants du CSN est fréquemment associée à des défauts de contrôle de la croissance et de fonction des organes, ce qui soutient son utilisation pour étudier des phénotypes cellulaires pertinents pour des maladies, sans impliquer de retombées thérapeutiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CSN8 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cops8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cops8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cops8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CSN8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cops8 pour l'étude de la signalisation de CSN8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cops8 essentiels à la fonction de CSN8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cops8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CSN8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CSN8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cops8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CSN8 plasmide HDR (m) et le CSN8 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cops8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cops8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.