Plásmido Doble Nickase (h) CRY2: sc-403171-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CRY2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CRY2 (h) y el plásmido de doble nickasa CRY2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CRY2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CRY2 Anticuerpo (3H4): sc-293263
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CRY2 | sc-403171-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CRY2 | sc-403171-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRY2 codifica la criptocromo 2, una flavoproteína componente central del reloj circadiano que actúa principalmente como represor transcripcional dentro del circuito de retroalimentación CLOCK–BMAL1. Al asociarse con proteínas PER y modular la transcripción impulsada por cajas E (E-box), CRY2 ayuda a coordinar las oscilaciones diarias de la expresión génica que influyen en el control del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN, el metabolismo y la señalización endocrina. La actividad de CRY2 se relaciona con el recambio proteico dependiente de ubiquitina y con vías de fosforilación que ajustan el período y la amplitud circadianos. La desregulación de programas circadianos asociados a CRY2 se ha implicado en fenotipos de sueño y cronobiología, y se estudia con frecuencia en el contexto de trastornos metabólicos y proliferativos en los que la alteración del reloj modifica la homeostasis celular.
CRY2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CRY2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CRY2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CRY2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CRY2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.