CRM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-400348-KO-2

Übersicht

XPO1 kodiert den nukleären Exportrezeptor CRM1, ein Protein der Karyopherin-β-Familie, das leucinreiche nukleäre Exportsignale erkennt und den RanGTP-abhängigen Transport von Proteinen und ausgewählten RNAs aus dem Zellkern ins Zytoplasma vermittelt. Durch die Kontrolle des nukleozytoplasmatischen Transports reguliert CRM1 den Zellzyklusverlauf, Stressantworten und Transkriptionsprogramme, indem es die Lokalisation von Frachtmolekülen wie Tumorsuppressoren, Transkriptionsfaktoren und Ribonukleoproteinkomplexen steuert. Die CRM1-Funktion ist in den Ran-GTPase-Zyklus und die Dynamik des Kernporenkomplexes eingebettet und trägt so zur Aufrechterhaltung kompartimentierter Signalübertragung und der Proteostase bei. Eine fehlregulierte XPO1/CRM1-Aktivität und eine veränderte Frachtverteilung werden häufig in der Krebsbiologie, bei antiviralen Antworten und in neurodegenerativen Mechanismen untersucht, bei denen der Kern–Zytoplasma-Transport gestört ist.

Das CRM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des XPO1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des XPO1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von XPO1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CRM1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von XPO1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CRM1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf XPO1-Exone abzielen, die für die CRM1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere XPO1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CRM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CRM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des XPO1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CRM1 HDR-Plasmid (h) und CRM1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von XPO1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten XPO1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.