CRIM1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404886-ACT

CRIM1 (cysteine rich transmembrane BMP regulator 1) kodiert ein Transmembranprotein, das die extrazelluläre Signalübertragung moduliert, indem es Wachstumsfaktoren bindet und präsentiert, insbesondere innerhalb von BMP/TGF-β‑Netzwerken. Es trägt zur Musterbildung während der Entwicklung, zu Zell‑Zell‑ und Zell‑Matrix‑Interaktionen sowie zur Regulation des Verhaltens von Endothel‑ und Epithelzellen bei, indem es die Verfügbarkeit von Morphogenen und deren Rezeptorbindung steuert. Die Aktivität von CRIM1 wurde mit Prozessen wie Angiogenese, Organmorphogenese und Gewebehomöostase in Verbindung gebracht, wobei veränderte Expression Differenzierungs‑ und Umbauprogramme verschieben kann. Eine Fehlregulation von CRIM1 wurde im Zusammenhang mit Entwicklungsstörungen und krebsassoziierten Phänotypen beschrieben, was seine Nutzung als Knotenpunkt zur Untersuchung des Gleichgewichts von Wachstumsfaktorsignalen und der Kontrolle durch das Mikroumfeld unterstützt.

CRIM1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CRIM1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CRIM1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CRIM1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CRIM1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CRIM1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CRIM1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CRIM1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CRIM1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CRIM1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.