Plásmido CRISPR de Activación (h) CPTI: sc-401811-ACT

El CPT1A humano codifica la carnitina palmitoiltransferasa 1A (CPTI), una enzima limitante de la velocidad localizada en la membrana mitocondrial externa que controla la entrada de ácidos grasos de cadena larga en las mitocondrias para la β‑oxidación. Al regular la formación de acilcarnitinas, la CPTI integra la demanda energética celular con el catabolismo lipídico y vincula la detección de nutrientes con el metabolismo oxidativo mitocondrial. La actividad de CPT1A influye en vías como la oxidación de ácidos grasos, la cetogénesis y las respuestas al estrés metabólico, y su regulación alterada se ha asociado con dislipidemia, resistencia a la insulina y disfunción metabólica hepática. Como nodo clave del flujo lipídico mitocondrial, CPT1A se estudia con frecuencia en contextos de remodelación metabólica y homeostasis energética en células humanas.

CPTI El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CPT1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CPTI El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CPT1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CPT1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CPTI. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CPT1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CPTI en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CPTI en células tumorales con expresión de CPT1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.