CPTI Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401811-ACT

O CPT1A humano codifica a carnitina palmitoiltransferase 1A (CPTI), uma enzima limitante da velocidade localizada na membrana externa mitocondrial que controla a entrada de ácidos graxos de cadeia longa nas mitocôndrias para a β-oxidação. Ao regular a formação de acilcarnitinas, a CPTI integra a demanda energética celular com o catabolismo lipídico e conecta o sensoriamento de nutrientes ao metabolismo oxidativo mitocondrial. A atividade de CPT1A influencia vias como oxidação de ácidos graxos, cetogênese e respostas ao estresse metabólico, e sua regulação alterada tem sido associada a dislipidemia, resistência à insulina e disfunção metabólica hepática. Como um nó-chave no fluxo lipídico mitocondrial, o CPT1A é frequentemente estudado em contextos de remodelação metabólica e homeostase energética em células humanas.

CPTI O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CPT1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CPTI O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CPT1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CPT1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CPTI. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CPT1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CPTI no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CPTI em células tumorais com expressão de CPT1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.