CPS2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403519-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CPS2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CPS2 Double-Nickase-Plasmid (h) und CPS2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CAD abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CPS2: sc-376072
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CPS2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403519-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CPS2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403519-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes CAD kodiert ein multifunktionales zytosolisches Enzym, das die ersten drei verpflichtenden Reaktionen der de-novo-Pyrimidinbiosynthese katalysiert, wobei die CPS2-Domäne die glutaminabhängige Synthese von Carbamoylphosphat vermittelt. Durch die Kopplung der Carbamoylphosphat-Synthetase-Aktivität mit den Funktionen der Aspartat-Transcarbamylase und der Dihydroorotase innerhalb eines einzigen Polypeptids unterstützt CAD die Nukleotidproduktion, die für DNA-Replikation, RNA-Transkription und die Synthese von Membranphospholipiden erforderlich ist. Die CAD-Aktivität ist mit proliferativen Signalwegen und dem zellulären metabolischen Zustand koordiniert und verknüpft damit die Verfügbarkeit von Pyrimidinen mit der Progression des Zellzyklus sowie Stressantworten. Eine Dysregulation des Pyrimidinstoffwechsels und veränderte CAD-Funktionen wurden in krebsrelevanten Modellen mit proliferativen Phänotypen und metabolischer Verwundbarkeit in Zusammenhang gebracht, wodurch CAD ein geeigneter Knotenpunkt zur Untersuchung der Nukleotidhomöostase ist.
CPS2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CAD-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CAD abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CAD-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CAD-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.