Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO CPI-17 (h): sc-401966
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- CPI-17 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique CPI-17, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CPI-17 Antibody (F-4): sc-48406
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO CPI-17 (h) | sc-401966 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
PPP1R14A code pour CPI-17, un inhibiteur de la phosphatase des chaînes légères de la myosine (MLCP) dépendant de la phosphorylation, qui amplifie la signalisation contractile en stabilisant la phosphorylation de la chaîne légère régulatrice de la myosine. Après phosphorylation par des kinases telles que la PKC et des voies associées à Rho, CPI-17 inhibe l’activité catalytique de PP1 au sein de la MLCP, régulant ainsi le tonus du muscle lisse, la dynamique du cytosquelette et la sensibilisation au calcium. Ce nœud de régulation intègre la signalisation des GPCR et de RhoA/ROCK avec le remodelage actomyosine et les programmes de motilité cellulaire. Une activité dérégulée de PPP1R14A/CPI-17 a été associée à une contractilité anormale du muscle lisse et à des contextes de remodelage prolifératif, ce qui soutient son étude dans des modèles de physiopathologie cardiovasculaire, des voies aériennes et gastro-intestinale.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CPI-17 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PPP1R14A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PPP1R14A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PPP1R14A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CPI-17.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PPP1R14A pour l'étude de la signalisation de CPI-17, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de PPP1R14A essentiels à la fonction de CPI-17
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PPP1R14A pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le CPI-17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CPI-17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PPP1R14A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le CPI-17 plasmide HDR (h) et le CPI-17 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PPP1R14A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PPP1R14A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.