Plasmide CRISPR/Cas9 KO COX5b (h): sc-405159

Présentation

COX5B code la sous-unité 5B de la cytochrome c oxydase (COX5b), un composant du complexe IV mitochondrial codé par le noyau, qui facilite le transfert d’électrons du cytochrome c vers l’oxygène moléculaire et contribue au pompage des protons à travers la membrane interne mitochondriale. En modulant l’efficacité de la phosphorylation oxydative, COX5b influence la production d’ATP cellulaire, l’équilibre rédox et le potentiel de membrane mitochondriale, en s’intégrant à des voies qui coordonnent la biogenèse mitochondriale et les réponses au stress. Les altérations de la fonction du complexe IV et de l’expression de COX5B sont fréquemment étudiées dans des contextes de dysfonctionnement mitochondrial, notamment le remodelage bioénergétique associé à la neurodégénérescence, aux troubles cardiométaboliques et au métabolisme tumoral. COX5B est également utilisé comme gène marqueur dans des travaux portant sur l’assemblage de la chaîne respiratoire, la signalisation des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et le dialogue mitochondrie–noyau.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COX5b (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COX5B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COX5B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COX5B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COX5b.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COX5B pour l'étude de la signalisation de COX5b, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COX5B essentiels à la fonction de COX5b
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COX5B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COX5b plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COX5b plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COX5B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COX5b plasmide HDR (h) et le COX5b (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COX5B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COX5B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.