COX5b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405159

Übersicht

COX5B kodiert die Cytochrom-c-Oxidase-Untereinheit 5B (COX5b), eine im Zellkern kodierte Komponente des mitochondrialen Komplexes IV, die den Elektronentransfer von Cytochrom c auf molekularen Sauerstoff unterstützt und zur Protonenpumpfunktion über die innere Mitochondrienmembran beiträgt. Durch die Modulation der Effizienz der oxidativen Phosphorylierung beeinflusst COX5b die zelluläre ATP-Produktion, das Redoxgleichgewicht und das mitochondriale Membranpotenzial und ist in Signalwege eingebunden, die die mitochondriale Biogenese und Stressantworten koordinieren. Veränderungen der Komplex-IV-Funktion und der COX5B-Expression werden häufig im Zusammenhang mit mitochondrialen Dysfunktionen untersucht, darunter bioenergetisches Remodeling bei Neurodegeneration, kardiometabolischen Erkrankungen und Tumormetabolismus. COX5B wird außerdem als Markergen in Studien zur Assemblierung der Atmungskette, zur Signalgebung durch reaktive Sauerstoffspezies und zur mitochondrial-nukleären Kommunikation verwendet.

Das COX5b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des COX5B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des COX5B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von COX5B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die COX5b-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von COX5B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der COX5b-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf COX5B-Exone abzielen, die für die COX5b-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere COX5B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom COX5b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom COX5b CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des COX5B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das COX5b HDR-Plasmid (h) und COX5b HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von COX5B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten COX5B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.