COX5a Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405025-ACT

COX5A codifica a subunidade 5A da citocromo c oxidase (COX5a), um componente do Complexo IV mitocondrial codificado no núcleo, que sustenta a transferência de elétrons para o oxigênio e a fosforilação oxidativa eficiente. Ao modular a montagem e a atividade da citocromo c oxidase, a COX5a influencia o fluxo da cadeia respiratória, o potencial de membrana mitocondrial e a produção de ATP, com efeitos a jusante na sinalização por ROS e na adaptação metabólica. A função alterada do Complexo IV é amplamente relevante para a disfunção bioenergética mitocondrial, que tem sido implicada em neurodegeneração, fenótipos cardiometabólicos e remodelação metabólica de células tumorais. Assim, a expressão de COX5A e a integridade do Complexo IV são comumente avaliadas em estudos de respostas ao estresse mitocondrial, adaptação à hipóxia e decisões de destino celular dependentes de energia.

COX5a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COX5A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

COX5a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COX5A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COX5A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de COX5a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COX5A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de COX5a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via COX5a em células tumorais com expressão de COX5A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.