Particules Lentivirales d'Activation (m) Cox-2: sc-422489-LAC

Le gène murin **Ptgs2** code la cyclooxygénase-2 (Cox-2), une enzyme inductible limitante de vitesse qui convertit l’acide arachidonique en prostaglandine H2, fournissant ainsi le réservoir de précurseurs pour la PGE2 et d’autres prostanoïdes bioactifs. L’expression de Cox-2 est rapidement augmentée par les cytokines inflammatoires, les facteurs de croissance et les signaux microbiens via des voies comprenant notamment NF-κB, MAPK/ERK et AP-1, reliant des signaux environnementaux à la production de médiateurs lipidiques. Par la signalisation des prostaglandines, Ptgs2 influence le tonus vasculaire, la nociception, l’homéostasie épithéliale et la régulation des réponses immunitaires innées et adaptatives. Une activité de Cox-2 dérégulée est largement étudiée dans des contextes d’inflammation chronique, de microenvironnements associés aux tumeurs et de modèles de lésion tissulaire, où une signalisation portée par les prostanoïdes remodèle la prolifération, les programmes angiogéniques et le recrutement des cellules immunitaires.

Les particules d'activation lentivirales Cox-2 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ptgs2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Cox-2 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ptgs2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Cox-2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ptgs2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.