Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Cosmc Double Nickase Plasmid (h): sc-409904-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cosmc Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cosmc Double-Nickase-Plasmid (h) und Cosmc Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf C1GALT1C1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cosmc: sc-271829
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cosmc Double Nickase Plasmid (h) | sc-409904-NIC | 20 µg | $410.00 |
C1GALT1C1 kodiert Cosmc, ein im endoplasmatischen Retikulum lokalisiertes molekulares Chaperon, das für die Faltung und Stabilität der Core‑1‑β1,3‑Galactosyltransferase (C1GALT1) erforderlich ist und damit die Biosynthese von Core‑1‑O‑Glykanen ermöglicht. Durch die Unterstützung der Muzin‑Typ‑O‑Glykosylierung beeinflusst Cosmc den Proteintransport, Zell‑Zell‑Interaktionen sowie lektinvermittelte Signalwege, die von korrekt ausgebildeten O‑Glykanstrukturen abhängen. Ein Verlust oder eine Funktionsstörung von Cosmc stört die Verlängerung von O‑Glykanen und begünstigt die Anreicherung verkürzter O‑Glykane wie der Tn‑ und Sialyl‑Tn‑Antigene, wodurch sich das Glykoproteom und das Verhalten von Oberflächenrezeptoren verändern. Abnorme, mit Cosmc assoziierte O‑Glykosylierungsmuster wurden mit Veränderungen der Immunerkennung und mit Kontexten maligner Transformation in Verbindung gebracht, was C1GALT1C1 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien in der Glykobiologie macht.
Cosmc Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des C1GALT1C1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von C1GALT1C1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die C1GALT1C1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit C1GALT1C1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.