Coronin 1A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403011-ACT

O gene humano **CORO1A** codifica a coronina 1A, uma proteína com repetições WD que se liga à actina, enriquecida em células hematopoiéticas, e que regula a remodelação do citoesqueleto, a migração celular e a dinâmica da sinapse imunitária. A coronina 1A coordena eventos de sinalização dependentes de actina a jusante de recetores de antigénio e de sinais de quimiocinas, influenciando o tráfego vesicular, o fluxo de cálcio e vias de sobrevivência em leucócitos. Alterações na expressão ou função de **CORO1A** têm sido associadas a desregulação imunitária, incluindo defeitos na homeostase de células T e maior suscetibilidade a infeções, tornando-o relevante para o estudo de mecanismos inflamatórios e associados a imunodeficiências. Como regulador ligado ao citoesqueleto, **CORO1A** também é usado como um nó para conectar a dinâmica da actina a redes de sinalização que controlam a ativação e a motilidade de linfócitos.

Coronin 1A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CORO1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Coronin 1A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CORO1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CORO1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Coronin 1A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CORO1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Coronin 1A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Coronin 1A em células tumorais com expressão de CORO1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.