Plásmido CRISPR de Activación (h) Coronin 1A: sc-403011-ACT

El gen humano **CORO1A** codifica la coronina 1A, una proteína de repeticiones WD que se une a la actina y está enriquecida en células hematopoyéticas, y que regula la remodelación del citoesqueleto, la migración celular y la dinámica de la sinapsis inmunológica. La coronina 1A coordina eventos de señalización dependientes de actina aguas abajo de receptores de antígeno y de señales de quimiocinas, influyendo en el tráfico vesicular, el flujo de calcio y las vías de supervivencia en leucocitos. La alteración de la expresión o la función de **CORO1A** se ha asociado con desregulación inmunitaria, incluidos defectos en la homeostasis de células T y susceptibilidad a infecciones, lo que la hace relevante para estudiar mecanismos vinculados a inflamación e inmunodeficiencias. Como regulador asociado al citoesqueleto, **CORO1A** también se utiliza como un nodo para conectar la dinámica de la actina con redes de señalización que controlan la activación y la motilidad de los linfocitos.

Coronin 1A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CORO1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Coronin 1A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CORO1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CORO1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Coronin 1A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CORO1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Coronin 1A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Coronin 1A en células tumorales con expresión de CORO1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.