Plasmide Double Nickase (h) connexin 30.3: sc-409363-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) connexin 30.3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide connexin 30.3 Double Nickase (h) et le plasmide connexin 30.3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GJB4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: connexin 30.3 Antibody (F6): sc-81802
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) connexin 30.3 | sc-409363-NIC | 20 µg | $410.00 |
GJB4 code la connexine 30.3, une sous-unité de canal des jonctions communicantes qui s’assemble en connexons pour permettre l’échange direct, entre cellules, d’ions et de petits métabolites. Par l’intermédiaire de ces jonctions, la connexine 30.3 contribue à la coordination, à l’échelle tissulaire, du potentiel de membrane, de la signalisation calcique et du couplage métabolique, soutenant la différenciation épithéliale et l’homéostasie. Dans l’épiderme, la communication médiée par les connexines s’articule avec les voies impliquées dans la prolifération des kératinocytes et le maintien de la barrière cutanée. Une fonction dérégulée de GJB4 et une connectivité altérée des jonctions communicantes ont été associées à des maladies cutanées héréditaires caractérisées par une cornification aberrante et une intégrité épithéliale compromise.
connexin 30.3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GJB4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GJB4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GJB4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GJB4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.