connexin 26 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420565

Übersicht

Gjb2 kodiert Connexin 26 (Cx26), ein Gap-Junction-Protein, das sich zu hexameren Connexonen zusammenlagert und interzelluläre Kanäle bildet, die den direkten Austausch von Ionen und kleinen Metaboliten ermöglichen. Durch die Koordination elektrischer und metabolischer Kopplung unterstützt Cx26 die Gewebehomöostase, die Funktion epithelialer Barrieren sowie die Synchronisierung zellulärer Reaktionen auf Stress- und Differenzierungssignale. Connexin 26 ist an Prozessen beteiligt, die mit der Kalziumsignalübertragung, dem Redox-Gleichgewicht und der kontaktvermittelten Regulation von Proliferation und Apoptose zusammenhängen. Eine gestörte Gjb2-Funktion ist stark mit syndromischer und nichtsyndromischer Hörbeeinträchtigung assoziiert und wird außerdem mit Störungen der epidermalen Differenzierung in Verbindung gebracht, bei denen eine veränderte Gap-Junction-Kommunikation zur Pathologie beiträgt.

Das connexin 26 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gjb2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gjb2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gjb2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die connexin 26-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gjb2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der connexin 26-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gjb2-Exone abzielen, die für die connexin 26-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gjb2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom connexin 26 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom connexin 26 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gjb2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das connexin 26 HDR-Plasmid (m) und connexin 26 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gjb2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gjb2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.