Plasmide CRISPR/Cas9 KO COMMD1 (h): sc-404544

Présentation

COMMD1 (protéine 1 contenant un domaine MURR1 du métabolisme du cuivre) est une protéine adaptatrice multifonctionnelle qui régule la signalisation dépendante de l’ubiquitine et le trafic membranaire, avec des rôles majeurs dans l’homéostasie du cuivre et le renouvellement intracellulaire des protéines. Elle module l’activité transcriptionnelle de NF-κB en influençant la stabilité et la dynamique nucléaire de composants clés de cette voie, ce qui affecte les programmes inflammatoires et de réponse au stress. COMMD1 interagit également avec la machinerie de tri endosomal et les processus de transport ionique, contribuant à la physiologie épithéliale et hépatique. Des altérations de la fonction de COMMD1 ont été associées à une dérégulation de la gestion des métaux, à une susceptibilité accrue au stress oxydant et à une signalisation inflammatoire aberrante, des éléments pertinents pour l’étude de la biologie hépatique, du stress métabolique et des réseaux de signalisation associés au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COMMD1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COMMD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COMMD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COMMD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COMMD1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COMMD1 pour l'étude de la signalisation de COMMD1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COMMD1 essentiels à la fonction de COMMD1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COMMD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COMMD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COMMD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COMMD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COMMD1 plasmide HDR (h) et le COMMD1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COMMD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COMMD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.