Plásmido Doble Nickase (h) COL6A1: sc-401069-NIC

COL6A1 codifica la cadena alfa-1 del colágeno tipo VI, un componente clave de la matriz extracelular (MEC) que se ensambla en microfibrillas con aspecto de cuentas y ayuda a organizar las redes de colágeno y las matrices adyacentes a la membrana basal. Mediante interacciones con integrinas y otros receptores de la MEC, COL6A1 contribuye a la adhesión celular, la mecanotransducción y la regulación de la arquitectura tisular, influyendo en programas de señalización como las vías de adhesión focal y de interacción MEC–receptor. Las alteraciones en la expresión o la estructura de COL6A1 pueden perturbar la integridad de la matriz y la comunicación célula–matriz, con relevancia para la homeostasis del tejido conectivo y la biología neuromuscular. En consecuencia, COL6A1 se estudia con frecuencia en modelos de remodelación matricial tipo fibrosis, disfunción de la MEC asociada a miopatías y regulación estromal de fenotipos celulares.

COL6A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus COL6A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de COL6A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de COL6A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con COL6A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.