Plásmido Doble Nickase (h) Cofilin 1: sc-400394-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Cofilin 1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Cofilin 1 (h) y el plásmido de doble nickasa Cofilin 1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CFL1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Cofilin 1 Anticuerpo (5): sc-53934
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Cofilin 1 | sc-400394-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Cofilin 1 | sc-400394-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CFL1 codifica la cofilina 1 humana, una proteína central de unión a actina que acelera el seccionamiento y la despolimerización de los filamentos de actina para mantener una rápida renovación de actina. Al acoplar la remodelación del citoesqueleto a señales aguas arriba procedentes de GTPasas de la familia Rho y de quinasas como LIMK y TESK, la cofilina 1 ayuda a coordinar la dinámica de los lamelipodios, la endocitosis, la citocinesis y la polaridad celular. La actividad de CFL1 está estrictamente regulada por el estado de fosforilación y por interacciones con fosfoinosítidos, vinculando la reorganización de la actina con la señalización y el tráfico de membranas. En la literatura, la desregulación de la dinámica de actina en la que participa CFL1 se ha asociado con fenotipos alterados de migración e invasión celular, así como con procesos neuronales y de respuesta al estrés relevantes para múltiples áreas de investigación de enfermedades.
Cofilin 1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CFL1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CFL1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CFL1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CFL1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.