CNTFRα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402322
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- CNTFRα Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im CNTFRα-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CNTFRα: sc-9993
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CNTFRα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-402322 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
CNTFR (ciliary neurotrophic factor receptor alpha; CNTFRα) kodiert eine über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) verankerte Rezeptoruntereinheit, die den ciliary neurotrophic factor bindet und sich mit LIFR und IL6ST/GP130 zu einem Signalkomplex zusammenschließt. Die Rezeptoraktivierung schaltet die Signalwege JAK/STAT, MAPK/ERK und PI3K/AKT an, die das Überleben und die Differenzierung von Neuronen sowie gliale Reaktionen regulieren und zudem ein breiteres Cross-talk in der Zytokinsignalisierung beeinflussen können. CNTFRα trägt zur Neuroentwicklung und zur neuromuskulären Biologie bei und wird häufig im Kontext der Erhaltung von Motoneuronen, von Reaktionen auf periphere Nervenverletzungen und der neuroinflammatorischen Signalübertragung untersucht. Eine veränderte Aktivität der CNTF–CNTFR-Achse wurde mit neurologischen Phänotypen und krankheitsrelevanten Prozessen wie Axonintegrität, Muskelinnervation und der Regulation von Zellschicksalsentscheidungen in Verbindung gebracht.
Das CNTFRα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CNTFR-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CNTFR-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CNTFR nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CNTFRα-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CNTFR-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CNTFRα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf CNTFR-Exone abzielen, die für die CNTFRα-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere CNTFR-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom CNTFRα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CNTFRα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CNTFR-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CNTFRα HDR-Plasmid (h) und CNTFRα HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CNTFR-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CNTFR-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.