Plasmide CRISPR/Cas9 KO CNOT6 (h): sc-406273
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- CNOT6 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique CNOT6, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CNOT6 Antibody (2193C2a): sc-81231
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO CNOT6 (h) | sc-406273 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
CNOT6 (sous-unité 6 du complexe transcriptionnel CCR4‑NOT) est une désadénylase catalytique au sein du complexe CCR4–NOT, qui raccourcit les queues poly(A) des ARNm afin d’initier la dégradation des transcrits et d’ajuster la traduction. En régulant la stabilité des ARNm, CNOT6 contribue au contrôle post‑transcriptionnel de l’expression génique dans des voies impliquées dans la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress, la différenciation et la signalisation de l’immunité innée. Son activité s’articule avec le silençage médié par les miARN ainsi qu’avec des réseaux plus larges de surveillance des ARN, modulant la dynamique du transcriptome en réponse aux signaux cellulaires. Un dérèglement de la désadénylation dépendante de CCR4–NOT, notamment une altération de la fonction ou de l’expression de CNOT6, a été associé à des programmes d’expression génique aberrants pertinents pour la biologie des cancers et des phénotypes liés à l’immunité.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CNOT6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CNOT6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CNOT6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CNOT6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CNOT6.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CNOT6 pour l'étude de la signalisation de CNOT6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CNOT6 essentiels à la fonction de CNOT6
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CNOT6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le CNOT6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CNOT6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CNOT6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le CNOT6 plasmide HDR (h) et le CNOT6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CNOT6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CNOT6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.