Plasmide CRISPR/Cas9 KO CNG-1 (m): sc-419713

Présentation

Cnga1 code la sous-unité alpha du canal cationique activé par les nucléotides cycliques CNG-1, un composant clé de la machinerie de phototransduction dans les photorécepteurs à bâtonnets de la souris. En formant des canaux cationiques dépendants du cGMP dans la membrane plasmique du segment externe, CNG-1 couple les variations de cGMP induites par la lumière à l’entrée de Na⁺/Ca²⁺, modulant le potentiel de membrane et la signalisation synaptique en aval. La fonction de ce canal s’articule avec le métabolisme du cGMP, l’homéostasie du Ca²⁺ et les mécanismes d’adaptation qui régulent la sensibilité visuelle. L’altération de la signalisation dépendante de CNGA1 est associée à un dysfonctionnement des bâtonnets et à des phénotypes de dégénérescence rétinienne, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes des maladies rétiniennes héréditaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CNG-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cnga1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cnga1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cnga1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CNG-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cnga1 pour l'étude de la signalisation de CNG-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cnga1 essentiels à la fonction de CNG-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cnga1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CNG-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CNG-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cnga1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CNG-1 plasmide HDR (m) et le CNG-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cnga1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cnga1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.