CLN2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405204

Übersicht

TPP1 kodiert die Tripeptidyl-Peptidase 1 (CLN2), eine lysosomale Serinprotease, die während des intralysosomalen Proteinabbaus Tripeptide vom N‑Terminus von Polypeptiden abspaltet. Die CLN2‑Aktivität unterstützt lysosomenabhängige katabole Prozesse, die sich mit dem Autophagie‑Lysosomen‑Fluss, dem endolysosomalen Transport und der Aufrechterhaltung der Proteostase in metabolisch aktiven Zelltypen überschneiden. Ein Verlust der TPP1‑Funktion stört die lysosomale Proteolyse und trägt zur Vulnerabilität von Neuronen bei; pathogene Varianten sind mit der CLN2‑assoziierten neuronalen Ceroid‑Lipofuszinose und einer breiteren lysosomalen Speicherpathologie verknüpft. Entsprechend wird TPP1/CLN2 häufig in Modellen zur Lysosomenfunktion, zu Stressantworten und zu Mechanismen untersucht, die eine beeinträchtigte Degradation mit zellulärer Dysfunktion koppeln.

Das CLN2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TPP1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TPP1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TPP1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CLN2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TPP1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CLN2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TPP1-Exone abzielen, die für die CLN2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TPP1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CLN2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CLN2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TPP1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CLN2 HDR-Plasmid (h) und CLN2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TPP1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TPP1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.