CLN1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404018-NIC

PPT1は、パルミトイル化タンパク質チオエステラーゼ1（CLN1）をコードしており、S-パルミトイル化タンパク質から長鎖脂肪酸アシル基を除去して、それらの分解・更新および再利用を可能にするリソソーム加水分解酵素です。脱パルミトイル化を制御することで、CLN1はリソソーム依存的なプロテオスタシス、エンドリソソーム輸送、ならびにオートファジー・リソソーム経路の動態を支え、その下流で神経細胞の維持やシナプス機能にも影響を及ぼします。PPT1活性の喪失は、脂質修飾基質やリソソーム蓄積物の蓄積を引き起こし、この経路が神経セロイドリポフスチン症の病態生物学、さらには神経変性や細胞ストレス応答のより広範な機構と関連することを示しています。

CLN1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PPT1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PPT1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PPT1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PPT1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。