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Partículas Lentivirales de Activación (h) CLIP4 | sc-413231-LAC | 200 µl | $455.00 |
La proteína humana CLIP4 (proteína enlazadora 4 con dominio CAP-Gly) codifica un factor asociado a los microtúbulos implicado en la coordinación de la organización del citoesqueleto y del transporte intracelular mediante interacciones con la dinámica del extremo plus de los microtúbulos. Al influir en la estabilidad de los microtúbulos y en procesos dependientes del tráfico, como la polaridad celular y la división, CLIP4 puede afectar vías que acoplan la remodelación del citoesqueleto con la transducción de señales y el posicionamiento de orgánulos. Se han descrito patrones de expresión alterados de proteínas reguladoras de microtúbulos, incluidos miembros de la familia CLIP, en distintos estados celulares proliferativos y de adaptación al estrés, lo que respalda la investigación de CLIP4 en contextos como la migración, la fidelidad mitótica y la estabilidad genómica. Estas características biológicas hacen de CLIP4 un objetivo útil para estudios mecanísticos de la regulación dependiente de microtúbulos en células humanas.
Las partículas de activación lentiviral CLIP4 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CLIP4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.
Las partículas de activación lentiviral CLIP4 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CLIP4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CLIP4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CLIP4 y la arquitectura reguladora.
El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.