Plásmido Doble Nickase (h) CLC-KA: sc-404050-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CLC-KA consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CLC-KA (h) y el plásmido de doble nickasa CLC-KA (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CLCNKA. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CLC-KA | sc-404050-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CLC-KA | sc-404050-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CLCNKA codifica el canal de cloruro específico del riñón CLC-KA, miembro de la familia CLC que conduce Cl⁻ a través de membranas epiteliales y favorece la reabsorción transepitelial de sales. La actividad de CLC-KA contribuye a la homeostasis de electrolitos y agua en la nefrona al acoplarse a procesos de transporte que moldean los gradientes iónicos tubulares e influyen en el equilibrio de líquidos. Las alteraciones de la función de CLCNKA se asocian con tubulopatías hereditarias con pérdida de sal y con fenotipos relacionados con la presión arterial, por lo que es relevante para estudios del manejo renal de iones y la fisiología del transporte. Este gen se investiga con frecuencia en modelos celulares de epitelio de la nefrona para analizar la conductancia de cloruro, la regulación del canal y la remodelación compensatoria de las redes de transporte de solutos.
CLC-KA El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CLCNKA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CLCNKA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CLCNKA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CLCNKA alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.