Plásmido Doble Nickase (h) CLC-2: sc-403513-NIC

CLCN2 codifica el canal de cloruro dependiente de voltaje CLC-2, un canal aniónico de la membrana plasmática que contribuye a la homeostasis del cloruro, la excitabilidad de la membrana y la regulación del transporte iónico epitelial y neuronal. La actividad de CLC-2 influye en el control del volumen celular, el movimiento transepitelial de fluidos y la estabilidad eléctrica mediante la coordinación con otros transportadores y canales en procesos como el equilibrio osmótico y la función de barrera. La alteración de la función de CLCN2 se ha vinculado a trastornos que implican el transporte epitelial y la fisiología del sistema nervioso, lo que respalda su relevancia en el estudio de las canalopatías y de la regulación de los flujos iónicos específicos de cada tejido. Como canal de expresión amplia, CLC-2 se investiga con frecuencia en contextos que incluyen la fisiología epitelial, la señalización glial y neuronal, y los mecanismos que acoplan los gradientes iónicos a las respuestas celulares al estrés.

CLC-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CLCN2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CLCN2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CLCN2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CLCN2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.