CLC-2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403513-NIC

CLCN2 codifica o canal de cloreto dependente de voltagem CLC-2, um canal aniônico da membrana plasmática que contribui para a homeostase do cloreto, a excitabilidade da membrana e a regulação do transporte iônico epitelial e neuronal. A atividade do CLC-2 influencia o controle do volume celular, o movimento de fluidos através do epitélio e a estabilidade elétrica por meio da coordenação com outros transportadores e canais em processos como o equilíbrio osmótico e a função de barreira. Alterações na função de CLCN2 têm sido associadas a distúrbios que envolvem o transporte epitelial e a fisiologia do sistema nervoso, reforçando sua relevância no estudo de canalopatias e da regulação do fluxo iônico específico de tecidos. Por ser um canal amplamente expresso, o CLC-2 é frequentemente investigado em contextos que incluem a fisiologia epitelial, a sinalização glial e neuronal e mecanismos que acoplam gradientes iônicos a respostas celulares ao estresse.

CLC-2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CLCN2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CLCN2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CLCN2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CLCN2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.