Plasmide CRISPR d'Activation (h) claudin-9: sc-403166-ACT

CLDN9 code la claudine-9, une protéine des jonctions serrées à quatre passages transmembranaires qui contribue à établir l’intégrité de la barrière épithéliale et une perméabilité paracellulaire sélective. En tant que composant des brins jonctionnels fondés sur les claudines, la claudine-9 coordonne l’adhérence cellule–cellule et la polarité apico-basale, et interagit avec des échafaudages jonctionnels qui relient les jonctions serrées au remodelage de l’actine et aux programmes de différenciation épithéliale. Des profils d’expression des claudines altérés sont fréquemment associés à une perturbation de la fonction barrière, à des modifications de l’organisation tissulaire et à des phénotypes de transition épithélio-mésenchymateuse qui influencent des comportements liés à l’invasion et aux métastases. CLDN9 est donc pertinent pour l’étude de l’assemblage des jonctions serrées, de la morphogenèse épithéliale et des dérégulations de la barrière associées aux maladies dans des modèles de cellules humaines.

claudin-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CLDN9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

claudin-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CLDN9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CLDN9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de claudin-9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CLDN9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de claudin-9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie claudin-9 dans les cellules tumorales présentant une expression de CLDN9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.