Plasmide CRISPR d'Activation (h) Clathrin Light Chain A/CLTA: sc-403962-ACT

CLTA code la chaîne légère A de la clathrine, une sous-unité accessoire essentielle du manteau de clathrine qui régule l’assemblage et la dynamique des triskélions de clathrine lors de l’endocytose médiée par la clathrine. En modulant la stabilité du manteau et les interactions avec les protéines adaptatrices, CLTA favorise l’internalisation des récepteurs, le recyclage des vésicules synaptiques et le trafic entre la membrane plasmique et les compartiments endosomaux. Ces processus influencent le renouvellement de la signalisation des récepteurs aux facteurs de croissance et des transporteurs de nutriments, reliant la fonction de CLTA aux voies qui gouvernent l’homéostasie membranaire et le tri intracellulaire. Les dérégulations du trafic endocytaire et les perturbations du réseau de clathrine sont fréquemment étudiées dans des contextes tels que la neurobiologie, la biologie des infections et la signalisation oncogénique des récepteurs, où des modifications de l’endocytose ou du recyclage peuvent remodeler le comportement cellulaire.

Clathrin Light Chain A/CLTA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CLTA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Clathrin Light Chain A/CLTA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CLTA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CLTA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Clathrin Light Chain A/CLTA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CLTA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Clathrin Light Chain A/CLTA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Clathrin Light Chain A/CLTA dans les cellules tumorales présentant une expression de CLTA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.